Москва 7-961-338-18-88 Наша страница Вконтакте

X054 

1. Общая характеристика стероидных соединений.

Стероиды – производные циклопентанопергидрофенантрена.

Стероиды – это твердые оптически активные вещества, обычно плохо растворимые в воде, подразделяющиеся на стерины, витамины D, желчные кислоты, желчные спирты, сапонины, кардиотонические стероиды, стероидные алкалоиды, стероидные гормоны.

Для природных стероидов характерно присутствие гидроксильной группы или кетогруппы в положении 3 и боковой цепи или кислородной функции в положении 17.

Биогенетическим предшественником стероидов является сквален.

Соединения, содержащие стероидный скелет, чрезвычайно широко распространены в живой природе. Они обнаружены практически во всех без исключения организмах – от одноклеточных до высших растений и млекопитающих.

Стероиды выделяют: из спинного мозга и желчи рогатого скота, щелочного гидролизата дрожжей, растительных масел и животных жиров, отходов целлюлозо-бумажного производства, различных растений или синтезируют из неприродного сырья.

Основной областью применения стероидов является медицина.

Поражает широта и разнообразие биологических функций, выполняемых стероидами. Это и организация клеточных мембран (стерины), и стимуляция или ингибирование роста растений (стероидные алкалоиды и стероидные сапонины), и регуляция линьки у насекомых (экдистероиды). Кортикостероиды регулируют углеводный обмен у всех позвоночных (глюкокортикоиды) и солевой обмен у наземных позвоночных (минералокортикоиды). Процесс размножения в значительной степени регулируется половыми гормонами (эстрогенами, андрогенами и гестагенами). Помимо основных функций стероиды выполняют также большое число второстепенных функций, например, участвуют в процессах регуляции биосинтеза.

Все эти многочисленные биологические функции выполняются стероидами, сравнительно мало на первый взгляд отличающимися друг от друга по химическому строению. Действительно, стероидные соединения различаются в основном лишь боковой цепью при С17, состоящей у холестерина из восьми атомов углерода и сокращающейся у андрогенов и эстрогенов до одной гидроксильной группы. Другие различия касаются числа и местоположения простых заместителей (гидроксильной, аминной, карбонильной группы) в ядре и появления или исчезновения двойных связей.

Примечательной особенностью стероидных соединений служит то, что они, судя по всему, появляются на самых ранних стадиях биологической эволюции. Во всяком случае, представители стеринов и некоторых других классов стероидов обнаружены у бактерий и простейших; имеются и палеонтологические данные об обнаружении стероидов в докембрийских отложениях.

Таким образом, выделяют три основные особенности стероидов:

1)     ранее появление стероидных соединений в живой природе;

2)     сохранение на всем протяжении эволюции характерного для стероидов циклопентанопергидрофенантренового скелета;

3)     большая широта и разнообразие осуществляемых стероидными соединениями биологических функций.

Поэтому стероиды действительно довольно хорошо подходят на роль соединений, обеспечивающих химическую основу биологической стабильности. Маркером, осуществляющим пиктографическую основу информационной записи, служит их легко узнаваемый скелет – весьма устойчивый и обладающий большой информационной емкостью. В самом деле, молекула холестерина, например, содержит 8 асимметрических центров, поэтому для нее число возможных стереоизомеров составляет 28 = 256. Введение лишь одного заместителя удваивает эту цифру, двух – учетверяет; к тем же последствиям приводит и появление различий в самих заместителях. В результате стероиды по информационной емкости на один углеродный атом скелета значительно превосходят полимерные молекулы.

2. Термин «биоконверсия». Значение процесса биоконверсии (биотрансформации) в практике получения стероидных соединений.

Биоконверсия (или биотрансформация) заключается в превращении метаболитов в структурно родственные соединения, обладающие более ценными свойствами, чем исходные вещества, под действием микробных клеток. Поскольку микроорганизмы могут проявлять свое каталитическое действие в отношении лишь каких-то определенных веществ, протекающие при их участии процессы более специфичны, чем чисто химические.

Наиболее известный процесс биотрансформации – получение уксуса в результате превращения этилового спирта в уксусную кислоту. Но среди продуктов, образующихся при биотрансформации, есть и такие высокоценные соединения, как стероидные гормоны, антибиотики, простагландины.

Способность микроорганизмов выступать в роли химических катализаторов впервые удалось использовать в полной мере для синтеза промышленно важных стероидных соединений. В последние 30 лет субстратная стереоспецифичность ферментов нашла широкое применение в производстве стероидов при осуществлении разнообразных реакций: гидроксилирования, дегидроксилирования, эпоксидирования, окисления, восстановления, гидрогенизации, дегидрогенизации, этерификации, гидролиза эфиров и изомеризации. Целью всеобъемлющих исследований в этой области было осуществление специфических структурных перестроек стероидов при мягких условиях. Специфичность таких реакций определяется либо выбором определенного вида микроорганизмов, либо химической модификацией субстрата, стереохимически исключающей другие реакции. Понимание зависимости между строением молекул субстрата и характером перестройки, осуществляемой микроорганизмами, позволило сформулировать требования для каждой конкретной реакции, например, для гидроксилирования. В определении скорости и направления реакции главную роль играют положение и ориентация замещающих групп в молекуле стероидов. История развития методов микробиологического преобразования стероидов представляет собой прекрасный пример сочетания химического подхода со специфичностью и разнообразием биологических систем. Кроме того, на этой основе может быть осуществлен синтез новых стероидов, обладающих лучшими фармакологическими свойствами.

3. Особенности получения кортизона.

Итак, применение методов, основанных на биоконверсии соединений, наиболее полно иллюстрирует история синтеза стероидных гормонов. В начале 1930-х гг. Кендалл из Фонда Мэйо и Райхштейн из Базельского университета выделили из надпочечников кортизон. Десятилетием позже Хенч из того же Фонда Мэйо установил, что кортизон эффективен при лечении ревматоидного артрита.

Химический синтез кортизона состоит из 37 стадий, и таким образом, 1 г получаемого вещества стоил очень дорого (до 200 долларов). Одна из ключевых стадий синтеза состоит во введении атома кислорода в положение 11α-стероидного ядра; эта стадия необходима для создания физиологической активности молекулы.

В 1952 г Петерсон и Мюррей из «Апджон и К°» обнаружили, что штамм Rhizopus arrhizus способен гидроксилировать прогестерон и тем самым вводить атом кислорода в положение 11α. Прогестерон – это ранний промежуточный продукт синтеза кортизона, и при помощи микробного гидроксилирования (которое осуществляется в промышленности микроорганизмами, близко родственными к R. arrhizus, например, R. nigricans) удалось синтезировать кортизон. При этом синтез кортизона сократился до 11 стадий вместо 37, а стоимость получаемого гормона упала до 6 долларов за 1 г.

Другие преимущества микробной конверсии заключались в том, что брожение происходило при температуре 37 °C в водной среде и при атмосферном давлении, тогда как химический синтез кортизона требовал экстремальных температур и давления.

Сегодня любой атом углерода стероидного ядра можно гидроксилировать при помощи определенных микроорганизмов.

4. Достижения российской науки в области микробной конверсии стероидных соединений.

Основоположником развития данного направления науки является академик Г.К. Скрябин. Поняв перспективность исследований в области биоконверсии стероидов и их громадное практическое значение, Г.К. Скрябин занялся данными исследованиями, организацией сотрудничества с химиками в системе Академии наук и отраслевых институтов, практической реализацией результатов работы.

Исследования микробиологической биоконверсии стероидов, включая разработку регламентов микробиологического получения стероидных препаратов, на первом этапе проводились объединенными усилиями коллективов Института микробиологии, Всесоюзного научно-исследовательского химико-фармацевтического института, Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова, заводов им. Л.Я. Карпова и “Акрихин”.

Первый цикл работ Г.К. Скрябина был посвящен поиску в природе микроорганизмов-трансформаторов и выяснению связи систематического положения этих культур со спецификой их трансформирующего действия.

Вторая группа работ обобщала исследования по изысканию путей контролируемого микробиологического превращения стероидов.

Третье направление исследований было связано с использованием микроорганизмов-трансформаторов для микробиологического получения гидрокортизона, эпигидрокортизона, преднизона, преднизолона и дианабола.

Основное внимание исследователей было сосредоточено на микробной конверсии микрокристаллических субстратов и изучении физиологии стероидтрансформирующих штаммов. Главными объектами исследования являлись процессы дегидрирования кортизона и гидроксилирование вещества “S” Рехштейна до гидрокортизона и эпигидрокортизона.

Под руководством Г.К. Скрябина и при непосредственном практическом участии уже в конце 60-х – начале 70-х годов были разработаны и внедрены в производство технологии получения преднизона и преднизолона, впервые в СССР было освоено промышленное производство стероидных препаратов на основе микробиологической трансформации.

Исследования в области микробной биоконверсии стероидов были продолжены под руководством Г.К. Скрябина в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР. В начале 70-х годов вместе с К.А. Кощеенко и другими сотрудниками этого института им были проведены первые эксперименты по иммобилизации интактных клеток микроорганизмов.

В 1975 г. на Советско-американской конференции Г.К. Скрябин выступил с докладом, в котором обосновал теоретические аспекты иммобилизации живых клеток микроорганизмов и возможности их практического использования, в том числе как биокатализаторов пролонгированного действия в синтезе стероидных гормонов. С этого времени значительно интенсифицировались исследования иммобилизованных микроорганизмов. За относительно короткий срок были исследованы физиология иммобилизованных клеток, особенности метаболизма, взаимодействие клеток с носителями и липофильными субстратами, изучены структурно-функциональные характеристики иммобилизованных систем, разработаны различные методы иммобилизации (включение в гели различной природы, адсорбция и др.). Эти исследования позволили сформулировать закономерности поведения живых клеток в иммобилизованном состоянии. С помощью живых иммобилизованных клеток удалось впервые осуществить такие процессы трансформации стероидов как: 1,2-дегидрирование, 1,2-восстановление, стереоспецифическое 17 b-восстановление, 20 a- и 20 -b-восстановление и др. Исследования фундаментального характера сочетались с практическими исследованиями. Так, в начале 80-х годов были разработаны и успешно прошли заводские испытания технологии получения преднизолона на основе использования иммобилизованных бактериальных клеток.

Целый ряд работ имели принципиальное значение для развития микробной биоконверсии стероидов: исследования в области физиологии иммобилизованных микроорганизмов, создание биокатализаторов пролонгированного действия на их основе, разработки технологий получения кортикостероидов и их дегидроаналогов.

Созданное Г.К. Скрябиным направление исследований продолжает активно развиваться. В последние годы исследования сконцентрированы на приоритетных направлениях синтеза стероидных полупродуктов и микробного биокатализа: селективной деградации боковой цепи природных стеринов и биоконверсии липофильных субстратов в нетрадиционных средах. Одним из последних достижений является создание конкурентоспособных технологий получения стероидных полупродуктов на основе молекулярного капсулирования стероидов.

5. Примеры микробиологической трансформации стероидов.

Рассмотрим некоторые примеры микробиологической трансформации стероидов: 

ПРОГЕСТЕРОН→ 11α-ГИДРОКСИПРОГЕСТЕРОН. 

Данная микробиологическая трансформация прогестерона в 11α-гидроксипрогестерон осуществляется под действием микроорганизмов рода Rizopus arrhizus. 

КОРТИЗОН→ПРЕДНИЗОН. 

Данная биологическая трансформация реализуется под действием бактерий рода Corynebacterium simplex. 

ГИДРОКОРТИЗОН→ПРЕДНИЗОЛОН. 

Как и в выше рассмотренном примере, биотрансформация гидрокортизона в преднизолон осуществляется под действие бактерий рода Corynebacterium simplex. 

К наиболее современным примерам биотрансформации стероидных соединений относится разработка метода синтеза анаболического препарата метандростенолона из метилтестостерона с использованием реакции микробиологического дегидрирования в присутствии природных или синтетических полимеров, таких как водорастворимые производные b-циклодекстрина или поливинилпирролидон. Оба полимера позволяют поднять нагрузку стероидного субстрата до 5 – 6 г/л, а степень превращения до 95 – 96 %. Использование полимеров на стадии трансформации позволило применить экологически чистый сорбционный способ выделения метандростенолона. Данный метод микробной конверсии был разработан в Центре "Биоинженерии" РАН.

Еще одной важной разработкой в области микробной конверсии стероидов стало изучение влияние различных источников углеводов и азота на процесс биотрансформации холестерина в андростендион, что легло в основу разработки новой композиции ферментационной среды, в состав которой не вошла соевая мука. Исключение этого белкового компонента из композиции питательной среды дает положительный эффект при дальнейших стадиях (выделение и химическая очистка) получения конечного продукта. Для процесса микробиологической трансформации холестерина в андростендион разработан технологический прием, позволяющий сократить сроки ферментации до 48 – 60 часов без уменьшения выхода целевого продукта. Данное исследование было также осуществлено в Центре "Биоинженерии" РАН.

6. Перспективные направления получения стероидных соединений. 

Итак, первым запатентованным процессом микробной трансформации стероидов является процесс 11α-гидроксилирования прогестерона некоторыми видами грибов, разработанный еще в 1937 г., но внедрить его в промышленность удалось лишь 1952 г.

С технологической точки зрения этот процесс не потерял актуальности и в настоящее время. Сегодня в данном процессе используются такие виды грибов, которые обладают весьма высокой специфичностью относительно места гидроксилирования.

Дальнейшие усовершенствования процесса биоконверсии стероидных соединений может быть основано на использовании спор грибов или на изменении состава культуральных сред. Упомянутая выше трансформация может быть выполнена с высоким выходом при концентрации субстрата 20 – 50 г/л.

Сходным образом по положению 7 и 14 может быть гидроксилирован дезоксикортикостерон. Если провести 6α-метилирование ядра молекулы стероида, то нежелательного гидроксилирования по 7α-положению не произойдет. Направленное гидроксилирование путем химической модификации широко используется на практике для повышения эффективности процесса.

Большинство поступающих в продажу стероидов, обладающих противовоспалительным действием, - это производные преднизолона, и именно этим определяется важная роль процессов микробного гидроксилирования кортикостерона (вещества S Рейхштейна) и его производных.

В промышленном масштабе производство гидрокортизона путем гидроксилирования кортикостерона осуществляется при участии некоторых видов грибов (например, Cunninghamella blakesleeana) с начала 50-х гг. За это время процесс был неоднократно усовершенствован.

Проблемы, связанные с деградацией субстрата, которая происходит при обычных условиях производства, можно решить путем регулярного его добавления или использования других микроорганизмов, например, Thieghemella orchidis.

Кроме того, ход синтеза можно контролировать, применяя метод химической модификации. Так, метилирование по 16α-положению подавляет нежелательное восстановление кетогруппы при С20, а образование уксуснокислого эфира по С17 стереохимически препятствует другим побочным реакциям. Конечное превращение гидрокортизона в коммерческие продукты со структурой преднизолона также осуществляется с помощью микрооганизмов. Химические методы здесь явно проигрывают по сравнению с микробиологическим способом. Одной из главных реакций в этом процессе является образование 1,2-двойной связи; для дегидрогенизации по положению 1 используют главным образом Mycobacterium globiforme и Arthrobacter simplex. Выход этой реакции зависит от того, в какой форме подается субстрат. Если он поступает в среду в микрокристаллах, то концентрацию субстрата можно довести до 400 г/л и получить выход 80 – 90 %.

Таким образом, вещество S Рейхштейна (кортикостерон) под действием бактерий рода Curvularia lunata подвергается биологической трансформации в кортизол или гидрокортизон, который в свою очередь под действием бактерий рода Arthrobacter simplex подвергается биоконверсии, результатом которой является образование преднизолона.

При модификации прегнана получают многие фармакологически ценные кортикоиды, гестагены и анестезирующие средства стероидной природы. Их производство основано на проведении широкого спектра превращений, осуществляемых микробами.

Другой важной группой соединений, модифицируемых с помощью микроорганизмов, являются андростаны и эстраны. Их применяют в промышленном синтезе половых гормонов и минералокортикоидных соединений. Примером такого рода служит превращение дрожжами 4-андростен-3,17-диона в тестостерон. Все возрастающее значение приобретает процесс окислительного расщепления боковой цепи С19-стероидов: он позволяет использовать дешевые стероиды для производства предшественников, идущих на синтез стероидов, крайне нужных фармакологам. И в этом случае приходится проводить химическую модификацию, чтобы предотвратить разрушение «скелета» молекул стероидов. Она заключается в гидроксилировании по положению С9 и направляет процесс микробной перестройки структур на разрушение боковых цепей. Так, холестерол или его соли превращаются в 4-холестен-3-он и 1,4-андростадиен-3,14-дион.

Микроорганизмы находят также применение при производстве сырья для получения стероидов. Таким сырьем являются стерины; их основными источниками служат диосгенин из корней Ялка, стигмастерин и ситостерин, экстрагируемые из жмыха соевых бобов. При этом необходимо отщепить боковую цепь молекулы растительных стеринов, в ряде фармацевтических компаний обнаружили, что для этого экономически выгодно использовать микобактерии. Некоторые мутантные штаммы микобактерий не способны завершить разложение молекулы стерина, они-то и вызывают накопление промежуточных продуктов, удобных для синтеза стероидных гормонов. Все эти усовершенствования, особенно связанные с использованием микроорганизмов, постепенно снизили цену кортизона.

Промышленное производство стероидов постоянно растет, чтобы удовлетворять растущий спрос на них в связи с появлением новых сфер применения (например, в области лечения гормональных недостаточностей, кожных болезней, аллергических и воспалительных процессов). В 1978 г в мире производились четыре основных стероида (альдостерон, кортизон, преднизон, преднизолон) общей стоимостью 300 млн. долларов.

Иногда для биоконверсии требуются смешанные культуры или последовательное добавление микробных штаммов или видов, каждый из которых осуществляет специфическую стадию биоконверсии.

Использование иммобилизованных клеток, более стабильных, чем ферменты или клеточные культуры, дает возможность повышать эффективность биоконверсии или уменьшать ее стоимость. Это может также помочь в решении проблем, связанных с нерастворимостью субстратов, таких как стероиды.

7. Использование культуры растительных тканей для получения стероидных соединений. 

На основе культур растительных тканей было выделено более 50 различных стероидных соединений: b-ситостерин, стигмастерин, диосгенин, холестерин, тигогенин, гитогенин, 24-метиленхолестерин и другие.

Виды диоскореи интенсивно изучаются в культуре ткани в качестве возможных продуцентов стероидных сапонинов. Диосгенин, представляющий интерес в качестве исходного вещества для производства гормональных препаратов, выделен из культур тканей видов Dioscorea, D. deltoidea, D. tokoro, D. composita, D. floribunda, Solanum xanthocarpum, S. laciniatum и другие. Содержание диосгенина в культурах тканей в зависимости от происхождения и условий культивирования растений различно: 1,33 % в культурах клубневого происхождения D. floribunda; 3,8 % в культуре ткани D. Deltoidea, росшей в хемостате.

В настоящее время наметился переход к промышленным способам культивирования тканей D. Deltoidea. Скорость роста культуры D. deltoidea в ферментере достигла 0,55 г/л в день, максимальная продуктивность по содержанию диосгенина – 12 мг на 1 л культуральной среды за один день в случае двухстадийного процесса (7,8 % от массы сухой ткани).

В сумме сапонины, выделенные из каллусных тканей D. deltoidea, обладали фармакологической активностью, аналогичной активности стероидных сапонинов из интактного растения.

Работы ученых с культурами тканей, продуцирующими стероидные соединения, внесли большой вклад в изучение биосинтеза этих соединений. Используя меченые предшественники (14С-ацетат, 14С-мевалоновую кислоту, 14С-2,3-оксидосквален, 4-14С-холестерин и другие соединения) было установлено, что ключевым предшественником сапонинов является циклоартенол, а также то, что гидроксилированию кольца А в биосинтезе йоногенина и токорогенина предшествует гидроксилирование боковой цепочки холестерина.

В результате комплекса таких исследований предложена следующая последовательность биосинтеза стероидных сапонинов: мевалонат–циклоартенол–холестерин–3, 16, 26–тригидроксихолест–5–ен–3, 16, 22, 26–тетрагидроксихолест–5–ен–диосгенин (йоногенин) – токорогенин. 

Задание 2. Выполнить лабораторную работу. 

Вариант 1. Биотрансформация лекарственных веществ в организме.

Качественная реакция на дезоксикортикостерон-ацетат (лекарственный препарат). 

Принцип метода. Реакция основана на взаимодействии дезокортикостерон-ацетата с серной кислотой с образованием продукта с образованием продукта синего цвета с красной флюоресценцией.

Техника выполнения работы. К 1 капле дезоксикортикостерон-ацетата добавить 4 – 5 капель 96 % спирта и 4 – 5 капель раствора концентрированной серной кислоты. Нагреть до закипания. Появляется синее окрашивание.

  1. Обнаружение 17-кетостероидов в моче (продуктов окисления стероидных гормонов). 

Принцип метода. Метод основан на взаимодействии 17-кортикостероидов с м-динитробензолом в щелочной среде с образованием продуктов конденсации розово-фиолетового цвета.

Техника выполнения работы. К 4 – 5 каплям мочи добавить 4 – 5 капель 2 % раствора м-динитробензола в спирте и 2 – 3 капли концентрированного раствора гидроксида калия. Появляется розово-фиолетовое окрашивание.

Вариант 2. Биотрансформация органических субстратов ферментативными системами культивируемых тканей растений.

Целью проводимого исследования является:

  1. Ознакомление с основными типами реакций биотрансформации, катализируемых монооксигеназными системами животных, растительных и микробных клеток.
  2. Освоение метода определения n-анилингидроксилазной активности культуры ткани женьшеня.

Принцип метода. Метод определения n-анилингидроксилазной активности основан на определении образующегося n-аминофенола. Реакция протекает на молекуле цитохрома Р-450 только в присутствии молекулярного кислорода и НАДФ×Н+, являющихся необходимыми кофакторами процесса микросомального окисления.

n-аминофенол реагирует с фенолом и в присутствии карбоната натрия образует окрашенный в синий цвет индофенольный комплекс.

Практическая значимость работы.

  1. На примере n-гидроксилирования анилина показано, что культуры тканей растений могут быть использованы не только в биосинтезе вторичных метаболитов de novo, но и для биотрансформации химических соединений.
  2. Способность культивируемых тканей растений может быть использована в биотехнологических синтезах фармацевтических препаратов (стероидов, алкалоидов, гликозидов и других).
  3. Путем селекции или с помощью методов генетической инженерии можно создавать линии клеток с более высокой трансформирующей способностью.

Техника выполнения работы. Навеску ткани (1,0 г) тщательно растирают в ступке с 1 мл буфера с целью гомогенизации. Гомогенат центрифугируют при 15000 об/мин. Надосадочная жидкость представляет собой экстракт ткани, свободный от митохондрий, ядер и обломков клеток. 

Схема проведения опыта. 

Вариант

Состав инкубационной смеси, мл

0,04 М трис-HCl буфер, рН 7,4

0,16 М MgCl2

0,03 М НАДФ×Н+

Экстракт культуры ткани

0,03 М анилин

Опыт

1,5

0,1

0,1

0,2

0,1

Контроль

1,6

0,1

 

0,2

0,1

Инкубацию проводят при 37 °С в течение 15 минут. Реакцию останавливают добавлением 1 мл 10 % раствора ТХУ. После осаждения белков смесь фильтруют, отбирают 1 мл фильтрата и определяют содержание в нем n-аминофенола путем добавления 0,5 мл 10 % раствора карбоната натрия и 1,5 мл 2 % фенола в 0,2 М растворе гидроксида натрия. Для развития окраски пробы выдерживают на водяной бане при 37 °С в течение 10 минут. Оптическую плотность опытной пробы против контрольной измеряют на фотоэлектроколориметре в кювете 10 мм при 670 нм.

Величину n-анилингидроксилазной активности рассчитывают по формуле:

С*1,5*30   ,

г ткани

где С – концентрация n-аминофенола, найденная по калибровочному графику;

1,5 – расчетный коэффициент численно равный объему экстракта, полученному из 1,0 г ткани;

30 – разведение пробы.

Литература: 

  1. Биологическая химия: Руководство к лабораторным занятиям/ Сост. В.П. Комов, В.Н. Шведова, Н.В. Кириллова, О.М. Спасенкова, В.И. Фирсова, Л.А. Троицкая. – СПб.: СПХФА. – 1998.
  2. Биотехнология в 8-ми томах/ Под ред. Егорова Н.С., Самуилова В.Д. – М.: Высш.шк. – 1988.
  3. Биотехнология: принципы и применения/ Под ред. Хиггинса И., Беста Д., Джонса Дж. – М.: Мир. – 1988.
  4. К практическим занятиям по биологической химии: Методические указания/ Под ред. В.И. Закревского. – Волгоград: ВМА. – 1999.
  5. Лекционный материал по биотехнологии.
  6. Микробиология продуцентов биологически активных соединений: Методические указания к лабораторным занятиям/ Сост. С.В. Гурина, Т.С. Потехина, Н.Н. Елинова. – СПб.: СПХФА. – 1997.
  7. Николаева Л.А. Культура тканей лекарственных растений и ее биотехнологическое использование: Текст лекций. – СПб.: СПХФИ. – 1992.
  8. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды/ Пер. с англ. Мехедова С.Л., Миркина С.М. – М.: Мир. – 1987.
  9. Сельскохозяйственная биотехнология: Учеб./ Под ред. В.С. Шевелухи. – М.: Высш. шк. – 1988. – 416 с.
  10. Словарь по биотехнологии/ Симонян А.В., Покровская Ю.С. – Волгоград. – 2002.

 

Темы рефератов. 

1. Проблемы биотрансформации стероидных структур.

2. Структура промышленного биотехнологического производства стероидных гормонов.

3. Подходы к решению проблемы селективности процессов биоконверсии.

4. Микробиологический синтез гидрокортизона.

5. Получение стероидных соединений на основе культур растительных клеток.

6. Перспективы осуществления процессов биоконверсии стероидных соединений с применением технологии иммобилизованных ферментов.

 



ИЛИ